脂質過氧化探針C11-BODIPY 581/591

實驗步驟

1. 樣品溶解：

商品開封後，離心機輕甩；隨後加入適量 DMSO 進行溶解，溶解度至少可達 25mg/mL。溶解後建議分裝-20℃避光保存，盡量避免反複凍融，防止吸潮。

【注】：樣品輕甩目的是為(wei) 了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。

2. 樣品使用：

1) 流式細胞分析：

懸浮細胞：800 g 離心 5 min 收集細胞沉澱；隨後 PBS 洗滌細胞兩(liang) 遍。

貼壁細胞：棄培養(yang) 液，用常溫 PBS 或培養(yang) 液輕洗細胞 2 次，隨後yi酶消化，800g 離心 5 min 收集細胞沉澱，隨後 PBS 洗滌細胞兩(liang) 遍，每個(ge) 樣本收集 1~5 ×105 個(ge) 細胞。(注意：操作過程中輕柔吹打細胞， 消化時間不宜過長，劇烈吹打或yi酶消化過度會(hui) 影響實驗結果)

本產(chan) 品 用於(yu) 脂質過氧化檢測的推薦濃度為(wei) 終濃度 5μM；配製方法：用新鮮空白培養(yang) 液配製終濃度為(wei)  5μM 的本產(chan) 品染色液待用，DMSO 含量≤5‰。

(注意：該步操作建議在消化細胞前準備好，以免細胞消化後久置影響實驗結果)

將事先配置好的脂質過氧化染色液加入收集的細胞沉澱中，推薦體(ti) 積為(wei)  500μL，隨後置於(yu)  37℃孵箱， 染色 30min，期間 5-10min 間隔輕彈細胞使其懸浮保證染色更充分。

染色結束後，800 g 離心 5 min，棄上清，隨後用PBS 清洗細胞 2 次，加入 200μLPBS 重懸細胞用於(yu) 流式分析。

2） 原位成像：

接種適當密度的細胞於(yu)  20mm 規格的蓋玻片上（也可用共聚焦小皿替代），給予實驗藥物處理適當時間後，吸去培養(yang) 液，用 PBS 洗滌細胞一遍加入 500 μL 配製好的脂質過氧化染色液，於(yu)  37℃染色 30min；（配製方法參考流式分析中的染色液配製）棄培養(yang) 液，PBS 洗滌細胞兩(liang) 遍後熒光顯微鏡或激光共聚焦下進行成像檢測。細胞在染色後應在 1 h 之內(nei) 完成檢測。

原位成像實驗範例：

下圖為(wei)  RSL3（10 μM）處理A549 細胞 24 h 後，使用本試劑（5μM）對活細胞中脂質過氧化水平進行原位染色後激光共聚焦成像結果。