Collagenase IV膠原酶IV型

產(chan) 品描述

膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nei) 切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現在膠原中，很少發現於(yu) 其他蛋白中）並切割該序列中性氨基酸（X）和甘an酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是唯yi一種可以降解具有三股超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結締組織內(nei) 。

本品來源於(yu) 溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅(jin) 含有膠原酶（更準確的稱法為(wei) 梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結締組織和上皮組織細胞外基質內(nei) 的其他蛋白，多糖和脂質，使得本品非常適用於(yu) 組織消化。

目前商業(ye) 化提供的細菌膠原酶主要根據膠原酶活性的差異，分為(wei) 四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應用上有所偏向：

1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、yi蛋白酶活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的製備；

2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用於(yu) 心髒、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的製備；

3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用於(yu) 乳腺細胞的製備；

4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低yi酶活性，通常用於(yu) 胰島細胞的製備，或者需要維持受體(ti) 完整性的細胞製備實驗。

本品為(wei) IV型膠原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion units），特別適用於(yu) 胰島組織的消化。

酶活力單位定義(yi)

在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nei) 水解膠原產(chan) 生相當於(yu) 1µM L-亮an酸的酶量定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 酶活力單位。

運輸及保存條件

室溫運輸。4℃避光保存，2年有效。儲(chu) 存液-20℃避光凍存。

使用方法

1. 膠原酶儲(chu) 存液的配製

向每管100 mg的膠原酶中加入100 µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平heng鹽溶液，含Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，製備成1g/mL（即1000×）的儲(chu) 存液。然後用低蛋白結合性的0.22 μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然後於(yu) -20 °C避光凍存。

使用前於(yu) 冰上解凍，避免反複凍融。其用於(yu) 組織和細胞分散的常用濃度為(wei) ：0.5-2.5 mg/mL，用於(yu) 軟骨消化的常用濃度為(wei) 1-2 mg/mL，需要根據特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的最佳工作濃度。

2．組織的分離

1. 使用無菌手術dao或剪刀將組織切成3-4 mm大小的組織塊；

2. 利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數次；

3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，並加入膠原酶至需要工作濃度；

4. 於(yu) 37℃孵育4-18 h。消化時使用水平搖床以及用3 mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率。

5. 已分散開的細胞可使用不鏽鋼或尼龍網篩篩得，收集備用。未wan全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液於(yu) 37℃繼續孵育；

6. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次；

7. 細胞培養(yang) 液重懸上述細胞，利用自動細胞計數器或其他方法計算活細胞密度。

8. 於(yu) 細胞培養(yang) 皿上利用合適細胞培養(yang) 基接種細胞。

3． 器官灌注

1. 向37℃預熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶，另添加3 mM的CaCl2有助於(yu) 提高分離效率；

2. 按照已優(you) 化的速率對相應的器官灌注膠原酶工作液；

3. 將上述過程中回收的灌注液流經不鏽鋼或尼龍網篩，從(cong) 而將已解離的細胞或小片段組織塊與(yu) 較大團塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液於(yu) 37℃進一步孵育；

4. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次；

5. 細胞培養(yang) 液重懸上述細胞，利用自動細胞計數器或其他方法計算活細胞密度。

6. 於(yu) 細胞培養(yang) 皿上利用合適細胞培養(yang) 基接種細胞。

注意事項

       1. 為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

2. 本產(chan) 品主要用於(yu) 科研領域，不宜用於(yu) 臨(lin) 床診斷或其他用途。