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保存與(yu) 運輸條件

冰袋運輸，-20℃避光保存，有效期1年。

產(chan) 品簡介

D-熒光素是zui流行和多功能的生物發光底物。螢火蟲熒光素酶/熒光素生物發光係統存在於(yu) 螢火蟲（Photinus pyralis）和其他幾種甲蟲中。熒光素酶通過二氧雜環丁酮中間體(ti) 氧化ATP活化的熒光素。螢火蟲熒光素酶通過熒光素的ATP依賴性氧化產(chan) 生光。來自該反應的560nm化學發光在數秒內(nei) 達到峰值，當熒光素和ATP過量存在時，光輸出與(yu) 熒光素酶活性成比例。螢火蟲熒光素酶長期以來與(yu) 抗體(ti) 結合，並在熒光素作為(wei) 檢測底物的免疫測定中用作標記物。與(yu) HRP和堿性磷酸酶相比，熒光素酶對化學修飾的耐受性較差。該酶的一個(ge) 特別優(you) 點是除了其高靈敏度之外，在哺乳動物組織中存在低內(nei) 源熒光素酶活性。熒光素酶的另一個(ge) 重要用途是衛生監測領域。熒光素酶/熒光素係統可用於(yu) 檢測汙染，因為(wei) 存在於(yu) 所有生物體(ti) 中的ATP需要產(chan) 生發光。這種ATP生物發光的主要應用是通過測試食品加工廠中的表麵來確定質量，以確定是否存在設備或產(chan) 品的汙染。

操作方法

以下方案是鉀鹽和鈉鹽製備的一個(ge) 例子，它可以適用於(yu) 大多數細胞類型和體(ti) 內(nei) 動物用途。

1.用於(yu) 體(ti) 外生物發光圖像測定的實施方案

1.1在無菌水中製備100mM（100-200X）熒光素原液。混合均勻。立即使用，或單獨使用等分試樣，並儲(chu) 存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

1.2在預熱的組織培養(yang) 基中製備0.5-1mM D-熒光素的工作溶液。

1.3從(cong) 培養(yang) 細胞中分離培養(yang) 基。

1.4將熒光素工作溶液加入細胞中，並在成像qian將細胞在37°C孵育5-10分鍾。

2.用於(yu) 體(ti) 內(nei) 生物發光圖像測定的實施方案

2.1在DPBS中製備15mg / mL熒光素儲(chu) 備溶液，不含Mg2+和Ca2+。 混合均勻。

2.2過濾器通過0.2μm過濾器過濾滅菌溶液。立即使用，或單獨使用等分試樣，並儲(chu) 存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

2.3在動物體(ti) 重150mg / kg（或10μL/ g熒光素儲(chu) 備溶液）成像qian10-15分鍾腹膜內(nei) （i.p.）注射熒光素。

注意：應對每種動物模型進行熒光素的動力學研究，以確定峰值信號時間。

3.熒光素報告分析分子測定的實施方案

3.1在無菌水中製備100mM熒光素儲(chu) 備溶液。 立即使用，或單獨使用等分試樣，並儲(chu) 存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

3.2製備1mM D-熒光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricine緩衝(chong) 液，pH7.8。

3.3將5-10μl細胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解試劑或緩衝(chong) 液作為(wei) 空白。

3.4根據製造商的說明，使用熒光素工作溶液的普利光度計。

3.5注入200μl熒光素工作溶液，無延遲，10秒積分時間。

注意事項

D-星空体育全站app下载安装溶於(yu) 無菌水和緩衝(chong) 液，溶解度可高達25mg/mL。一般使用濃度為(wei) 3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩定性非常重要。當溶液的pH<6.5（發生水解作用）或>7.5（發生消旋化作用，D型轉化為(wei) L型）的情況下，D-星空体育全站app下载安装相對不穩定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。儲(chu) 備溶液可以在不含ATP的水中製備，並在-20°C下避光儲(chu) 存。必須用適當的堿中和遊離酸溶解。

D-熒光素可與(yu) 任何現有的文獻或ATP分析係統一起使用。

如果檢測ATP，請戴上手套並使用無ATP容器，盡量減少所有可能的ATP汙染源。僅(jin) 使用無菌無ATP水和試劑。使用高壓滅菌水進行所有試劑製備。