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凋亡和焦亡的區別
細胞凋亡與(yu) 細胞焦亡同為(wei) 細胞程序性死亡，均可出現染色質凝聚、核濃縮以及均依賴半胱天冬酶，但二者在諸多方麵都大相徑庭，其具體(ti) 區別如下：
細胞凋亡 | 細胞焦亡 | ||
概念 | 在一定的生理或病理條件下，受內(nei) 在遺傳(chuan) 機製控製，按照自身程序主動性、生理性的死亡過程 | 又稱細胞炎性壞死，炎性小體(ti) 引發的一種程序性細胞死亡方式 | |
誘導刺激 | 生理或病理 | 病理性刺激 | |
特征 | 無炎症反應、凋亡小體(ti) 形成 | 明顯的炎症反應、焦亡小體(ti) 形成 | |
形態學 | 細胞 | 縮小 | 腫脹膨大 |
細胞膜 | 結構完整 | 破裂 | |
細胞器 | 完整 | 變形 | |
DNA | 降解為(wei) 180-200bp及其整倍數的片段 | 隨機降解 | |
核形態 | 核固縮(邊緣染色質不可逆的凝結)和DNA片段化 | 染色質濃縮、沒有DNA斷裂 | |
分子機製 | Caspase-2/-3/-6/-7/-8/-9/-10，其中,caspase-3為(wei) 細胞凋亡的主要調控因子 | 人源性的caspase-1/-4/-5和鼠源性的caspase-1/-11 | |
細胞焦亡檢測
原理：炎性小體(ti) 激活可控製caspase-1的活化和裂解,導致效應性促炎細胞因子,如IL-1β前體(ti) 和IL-18前體(ti) 的成熟和釋放,引發一係列炎症反應。焦亡相關(guan) 的caspase是裂解GSDMD導致細胞焦亡的zui強因素。
1. 形態變化
» 掃描電鏡觀察細胞形態
» TUNEL染色
» 免疫熒光染色（gasdermin D，GSDMD）
2. 檢測焦亡相關(guan) 蛋白
» 檢測焦亡相關(guan) 基因或蛋白的表達水平（Caspase-1、4、5、11；GSDMD等）
» ELISA試劑盒檢測炎症因子的水平（IL-1β、IL-18等）
» CCK-8測定細胞活力
細胞凋亡檢測
1. 凋亡早期
◆ 檢測指標
◆ 原理
位於(yu) 細胞膜內(nei) 側(ce) 的磷脂酰絲(si) 氨酸（Phosphotidylserine, PS）由細胞膜的內(nei) 側(ce) 翻轉到細胞膜表麵，暴露在細胞外環境中。Annexin-Ⅴ（膜聯蛋白-V）是一種分子量為(wei) 35-36kDa的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與(yu) PS高親(qin) 和力結合，通過細胞外側(ce) 暴露的PS與(yu) 凋亡早期細胞的胞膜結合。
◆ 客戶數據
2. 凋亡中期
◆ 檢測指標
◆ 原理
線粒體(ti) 膜電位（△Ψm ）的丟(diu) 失導致線粒體(ti) 膜中線粒體(ti) 通透性轉換孔的開放，細胞色素C（Cytochrome C）被釋放到細胞漿中，致使Caspase被激活從(cong) 而誘導細胞凋亡。JC-1是一種廣泛用於(yu) 檢測線粒體(ti) 膜電位△Ψm的理想熒光探針，表現出電勢依賴性的積聚在線粒體(ti) 內(nei) 。正常線粒體(ti) 內(nei) ，JC-1聚集在線粒體(ti) 基質中形成聚合物，聚合物發出強烈的紅色熒光（Ex=585 nm，Em=590 nm）；而凋亡細胞，線粒體(ti) 跨膜電位去極化，JC-1從(cong) 線粒體(ti) 內(nei) 釋放，濃度降低，逆轉為(wei) 發射綠色熒光的單體(ti) 形式。線粒體(ti) 的去極化程度也可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。
◆ 客戶數據
圖4.熒光探針檢測U87細胞樣本實驗結果
3. 凋亡晚期
◆ 檢測指標
◆ 原理
染色體(ti) DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chan) 生大量的粘性3-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將熒光素/酶標記的dUTP結合到DNA的3-末端，從(cong) 而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為(wei) 脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(TUNEL)。
◆ 客戶數據
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