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太實用了!轉染試劑常見問題大全,你想要的答案這裏都有

更新時間:2023-08-24      點擊次數:471

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Q1:
配製核酸轉染試劑複合物時能否有血清的存在?

血清的存在會(hui) 影響脂質體(ti) 的形成,建議配製核酸轉染試劑複合物時采用無血清培養(yang) 基(一般推薦MEM 培養(yang) 基)。


Q2:

轉染試劑能否凍存?

不能。本試劑一定要4 ℃保存,要注意避免反複多次長時間開蓋,長時間開蓋會(hui) 導致脂質體(ti) 氧化而影響轉染效率。

Q3:

使用脂質體(ti) 核酸轉染試劑需要注意什麽(me) ?

1)細胞鋪板密度較高,以90%-95%為(wei) 佳;

2)使用高純度的DNA有助於(yu) 獲得較高的轉染效率;

3)製備轉染複合物時要求用無血清培養(yang) 基稀釋DNA和轉染試劑;

4)轉染的時候培養(yang) 基中不能添加抗生素;

5)試劑應該在4度保存,要注意避免多次反複長時間開蓋;

6)初次使用應優(you) 化DNA濃度和陽離子脂質體(ti) 試劑量以得到最大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。

Q4:
轉染後需要進行終止嗎?

不需要。脂質體(ti) 複合物可以穩定存在6個(ge) 小時。如果在進行轉染前沒有進行細胞換液,為(wei) 了保證細胞正常生長所需的營養(yang) ,需要在4~6小時後換用新的培養(yang) 基。但如果轉染之前已進行過換液則在脂質體(ti) 轉染後不需要進行再次換液。

Q5:

若想提高轉染效率,應該注意什麽(me) ?

1)轉染時細胞的密度,90%-95%。

2)轉染時,核酸和脂質體(ti) 稀釋液要用MEM無血清培養(yang) 基。

3)轉染後4-6h可選擇換液。

Q6:

可否進行DNA和siRNA的共轉染?效果如何?

DNA和siRNA的共轉染時候,siRNA轉染效率差。

Q7:

轉染試劑可否進行慢病毒包裝的轉染呢?

慢病毒包裝是可以的,但是在進行慢病毒包裝的效率不一定和轉染的效率有關(guan) ,同時還跟包裝質粒的選擇和質粒間的比例有關(guan) 係。

 

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