為什麽要選擇無血清低DMSO細胞凍存液

細胞培養(yang) 技術創建於(yu) 二十世紀初，曆經一個(ge) 多世紀的發展，現在已成為(wei) 生命科學領域越來越重要的實驗技術之一。由於(yu) 細胞的特殊性，在細胞培養(yang) 過程中，或在細胞建株和建係過程中，隨著傳(chuan) 代次數的增加，細胞的各種生物特性都會(hui) 逐漸發生變化。因此，原始細胞種子的及時保存就顯得尤為(wei) 必要。在雜交瘤單抗的製備過程中，雜交瘤細胞以及克隆化得到的亞(ya) 克隆細胞的凍存，是bi不可少的操作。因為(wei) 在沒有建立一個(ge) 穩定的細胞係或穩定分泌抗體(ti) 的細胞係的時候，在細胞的培養(yang) 過程中隨時可能因細胞的汙染、分泌抗體(ti) 能力的喪(sang) 失或遺傳(chuan) 變異等等緣故而導致實驗失敗，如果沒有原始細胞的凍存，則將因為(wei) 上述的意外而前功盡棄。除此之外，購買(mai) 、交換和運送某些細胞也需要利用細胞凍存的形式來進行。因此，及時方便地進行細胞的凍存在實際工作中顯得十分必要。

細胞凍存要取得好的效果，多采用血清、甘油或二甲基亞(ya) 碸(DMSO)等作為(wei) 保護劑，最大限度的保存細胞活力。這些物質有些能提高細胞膜對水的通透性，在緩慢冷凍過程中可使細胞內(nei) 的水分滲出細胞外，減少細胞內(nei) 冰晶的形成，從(cong) 而減少由於(yu) 冰晶形成造成的細胞損傷(shang) 。同時，有些保護劑在細胞外也能減輕溶液中高濃度溶質對細胞的損傷(shang) ，進一步避免細胞在冷凍和複蘇過程中受到損傷(shang) 。滲透性保護劑DMSO和非滲透性保護劑血清(主要含白蛋白)是使用最為(wei) 廣泛，效果最為(wei) 穩定可靠的。

此外，采用“慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為(wei) -1到-2℃/分鍾，當溫度低於(yu) -25℃時可加速，到-80℃之後可直接投入液氮內(nei) (-196℃)。複蘇細胞采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nei) 即融化，避免由於(yu) 緩慢融化使水分滲入細胞內(nei) 形成胞內(nei) 再結晶對細胞造成損傷(shang) 。

現有凍存方法存在的問題:

1、DMSO對細胞存在一定的毒性，用量受到限製，降低或者不使用DMSO，尋找其它替代物是最hao的選擇。但是目前，該技術領域還未發現凍存保護效果能與(yu) DMSO媲美的物質，因此，聯合其它成分，形成新的配方，降低DMSO的含量就成了較為(wei) 現實的選擇。

2、血清，即使是純化得到的白蛋白，由於(yu) 其動物來源的特性，會(hui) 極大增加帶來病毒等感染物質的可能。而且，血清來源受限，價(jia) 格昂貴，所以其使用也必然會(hui) 受到越來越多的限製。因此，尋找替代血清的非滲透性保護劑也顯得尤為(wei) 必要。

3、目前，zui成熟和zui穩定的凍存細胞技術是將加有保護劑的細胞懸液置於(yu) -196℃液氮中，這樣可以使細胞暫時脫離生長狀態而保持細胞的特性，在需要的時候經過複蘇程序，使得細胞重新生長增殖以用於(yu) 實驗。細胞儲(chu) 存在-196℃液氮中，理論上儲(chu) 存時間是無限的，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經過程序降溫，如先將冷凍管置於(yu) 4℃冰箱10分鍾，然後移至-20℃冰箱30分鍾，再移至-80℃冰箱保存16-18個(ge) 小時(或隔夜)，最後才移至液氮罐中進行長期的儲(chu) 存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個(ge) 小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量的死亡。)

市麵上“無血清細胞凍存液"獲得了廣大科研工作者的喜愛。 而本公司提供的一種新的凍存液體(ti) 係: 無血清低DMSO細胞凍存液78EC10001，不僅(jin) 可以省卻對血清的使用，而且還顯著降低了DMSO的用量。同時，本專(zhuan) li細胞凍存液凍存的細胞懸液可以直接放置於(yu) -80℃冰箱，既不需要繁瑣的程序降溫或采用程序降溫儀(yi) ，更不需要放置在-196℃液氮中，節省了大量時間和精力。該細胞凍存液通用於(yu) 人和各種動物細胞株。特別配方(主要成分為(wei) 5% DMSO和氨基酸)具有有效提高細胞凍存活率和複蘇活力。不含血清及動物來源性蛋白，能減少各類病毒、黴菌和支原體(ti) 等的汙染，確保凍存細胞安全。既適用於(yu) 一般培養(yang) 細胞的凍存，也適用於(yu) 無血清培養(yang) 細胞和蛋白表達細胞的凍存。

產(chan) 品特點:

1. 高安全性，不含血清及動物源成分，病毒、黴菌和支原體(ti) 等汙染可能性低，各批產(chan) 品之間有更高的產(chan) 品質量一致性。

2. 低DMSO，DMSO的含量為(wei) 10%(v/v)，極大降低了對細胞潛在的毒性作用。

3. 細胞存活率高，無批次差異。

4. wan全凍存液配方，可直接使用，方便簡捷。

5. 可直接存放於(yu) -80℃冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)，不需要采用程序降溫儀(yi) ，更不需要放置在-196℃液氮。

6. 可原位凍存，比如雜交瘤細胞的亞(ya) 克隆，可以大規模減少工作量，避免汙染。

凍存效果對比:

圖1. 小鼠成纖維細胞3T3細胞複蘇後細胞狀態對比圖

對照B:存活率89% 本產(chan) 品:存活率97%

圖2. 人胚腎細胞293E細胞複蘇後細胞狀態對比圖

對照B:存活率86% 本產(chan) 品:存活率93%

注:對照A: DMEM培養(yang) 基+10%血清+10%DMSO，液氮凍存;

對照B: 無血清細胞凍存液(DMSO 10% v/v);

附:通用細胞凍存液，無血清細胞凍存液、無血清低DMSO細胞凍存液的比較