慢病毒滴度快速檢測卡 說明書

  本產(chan) 品是采用膠體(ti) 金免疫層析技術快速檢測分泌到慢病毒包裝上清中的遊離囊蛋白P24，以此作為(wei) 一個(ge) 靈敏的、間接的替代指標來顯示病毒產(chan) 量的檢測卡，通過對囊蛋白 P24 的檢測，能快速確定包裝液中的慢病毒滴度是否已經達到收獲需要。該方法僅(jin) 需要 5~10min 即可得到結果，與(yu) 傳(chuan) 統轉染方法需要花費2-3天相比，具有明顯優(you) 勢。

產(chan) 品性質

關(guan) 於(yu) 慢病毒滴度

一個(ge) 慢病毒顆粒（Lentiviral Particle, LP）中約有 2000 個(ge) P24 蛋白分子，用以下公式可以計算慢病毒載體(ti) 的顆粒數（LP）：

一個(ge) LP 相當於(yu) ：2000×24×10^3/(6×10^23)g of P24=8×10^-5 pg of P24；或者說，1ng P24=1.25×10^7 LPs（≈1.25×10^4-5 TU**）

正常情況下，每 100-1000 LPs 中會(hui) 有 1 個(ge) 具有感染活性的病毒載體(ti) ，即 1 TU（Transducing Unit）。

注意：上述公式計算得到的 LP 值是理論值，檢測樣品中含有的遊離的 P24 蛋白可能會(hui) 使該值偏高。

提示：通常上清中病毒含量需要超過 10^6 TU/ml，才能確保濃縮純化後得到足夠濃度的慢病毒載體(ti) （一般能濃縮 150 倍左右）。

本法給出的是檢測線（T 線）強度與(yu) 功能滴度（Infectious Unit/mL, IFU/mL 或 Transduction Unit/mL, TU/mL）而非物理滴度（Viral Particle/mL, VP/mL）的相關(guan) 性。這一相關(guan) 性與(yu) 病毒所轉染的細胞有關(guan) 。例如，上圖中，用 3 倍連續稀釋的包裝上清轉染 HEK293 細胞。72 小時後，在熒光顯微鏡下觀察表達 ZsGreen1 的細胞，並用流式細胞儀(yi) 測定HEK293 細胞的轉染率，得到功能滴100µL 滴度為(wei) 2 10 6 IFU/ml 的包裝上清加到樣品孔中，10 分鍾後顯深紅色“T 線"。