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支原體(ti) 汙染會(hui) 對細胞各個(ge) 方麵都造成不良影響，已經成為(wei) 細胞培養(yang) 中高度重視的問題，因此，定期進行支原體(ti) 汙染檢測是十分必要的。本支原體(ti) 檢測試劑盒是采用PCR方法，特異性的檢測各種培養(yang) 細胞生物材料（如細胞培養(yang) 物、實驗動物分泌物、動物血清等）中支原體(ti) 的汙染。試劑盒使用的混合引物是針對支原體(ti) 16s rRNA序列的保守區域設計的特異性引物，可直接使用細胞培養(yang) 液作為(wei) PCR模板，特異性擴增支原體(ti) DNA，搭配配套的Mycoplasma PCR Mix（2×）一小時內(nei) 即可完成，本試劑盒檢測靈敏度高，可檢測低至20個(ge) 拷貝的支原體(ti) 。
組成 | 78EA10015-50T |
Mycoplasma PCR Mix（2×） | 1 mL |
Mycoplasma Primer Mix | 100 μL |
Positive Control | 50 μL |
Mycoplasma Free Water | 1 mL |
1. 樣品準備：取適量待檢細胞培養(yang) 上清於(yu) 潔淨的PCR管中，利用PCR儀(yi) 95℃熱處理5 min後作為(wei) 模板。血清樣本可利用無支原體(ti) 去離子水水稀釋後，取適量樣本於(yu) 潔淨的PCR管中，利用PCR儀(yi) 95℃熱處理5 min後作為(wei) 模板；
2. PCR體(ti) 係配製：每次實驗需設置陰性對照（將1 μL待檢樣品換成等量的無支原體(ti) 去離子水）與(yu) 陽性對照（在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control後一起作為(wei) Template），實驗時戴一次性口罩與(yu) 手套，謹慎操作，防止操作不當引入外源支原體(ti) 汙染；
3. PCR程序設置：
步驟 | 溫度 | 時間 | 周期 |
Initial Denaturation | 98℃ | 2 min | 1 |
Denaturation | 98℃ | 20 s | 30 |
Annealing | 56℃ | 25 s | |
Extension | 72℃ | 10 s | |
Final extension | 72℃ | 5 min | 1 |
Hold | 4-16℃ | Forever |
4. 凝膠電泳：取10 μL PCR產(chan) 物，使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測；
5. 結果分析：每次實驗通過與(yu) 陰性對照、陽性對照檢測結果比較確認樣品支原體(ti) 汙染情況，陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結果中有條帶很有可能是P
CR體(ti) 係中出現汙染，建議重新實驗確認結果。如有必要，也可對PCR產(chan) 物進行常規測序，以確定具體(ti) 的支原體(ti) 種屬。
| 貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
| 78EA10015-50T | PCR法支原體檢測試劑盒 | 50T | Biohub |
