mRNA Cap 2′-O-甲基轉移酶（50U/μL）說明書

mRNA Cap 2′-O-甲基轉移酶（50U/μL）說明書(shu)

產(chan) 品描述

mRNA Cap2氧甲基轉移酶（mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase）是一種來自於(yu) 牛痘病毒的重組蛋白。該酶可以在RNA的5´末端緊挨帽結構的第一個(ge) 核苷酸的2´-O位置處添加一個(ge) 甲基基團。該酶利用SAM作為(wei) 甲基供體(ti) 來甲基化加帽RNA，從(cong) 而形成Cap1結構。Cap1結構能增強mRNA的翻譯效率，因此可有助於(yu) 改善mRNA轉染和顯微注射實驗中的表達。該酶需要有m7GpppN即7-甲基鳥苷帽結構的RNA作為(wei) 底物。

產(chan) 品性質來源：攜帶牛痘病毒2'-O-甲基轉移酶基因的E. coli分子量：82 kDa純度：≥95%比活：50 U/μL比活單位定義(yi) ：在 37℃下1 h內(nei) 將10 pmol 80 nt 的帶帽RNA轉錄物甲基化所需要的酶量定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 活性單位存儲(chu) 緩衝(chong) 液：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% TritonX-100，50%甘油，pH 8.0 產(chan) 品組分

產(chan) 品應用【Uncapped RNA 一步加帽法 】適用於(yu) 10 μg以內(nei) uncapped RNA（≥100 nt）的加帽反應，反應體(ti) 係20 μL，且可根據實驗需要放大。1. 取10 μg RNA，用RNase free water將適量RNA稀釋至14 μL；2. 將RNA置於(yu) 65℃加熱5 min，結束後冰上放置5 min；3. 按照右側(ce) 表格依次加入各組分；4. 37℃反應60 min；5. RNA加帽完成，可進行後續實驗。

【 Cap 0-RNA 的甲基化反應 】適用於(yu) 10 μg以內(nei) Cap 0-RNA（≥100 nt）的甲基化反應，反應體(ti) 係20 μL，且可根據實驗需要放大。1. 用RNase Free Water將適量RNA稀釋至15 μL；2. 將RNA置於(yu) 65℃加熱5 min，結束後冰上放置5 min；3. 按照右側(ce) 表格依次加入各組分；4. 37℃孵育60 min；5. RNA加帽完成，可進行後續實驗。

注意事項： （1）用於(yu) 加帽反應的RNA在使用前應進行純化並溶解於(yu) RNase free water 。溶液中不能含有EDTA和鹽。（2）加帽酶反應前加熱RNA可以去除轉錄產(chan) 物5′的二級結構。如果轉錄產(chan) 物的5′端結構複雜，可將加熱時間延長至10 min。（3）如果轉錄產(chan) 物的5′端結構複雜，為(wei) 提高加帽效率可將反應時間延長至120 min。（4）SAM在室溫下會(hui) 逐漸降解，SAM降解會(hui) 導致N 7 甲基化效率降低，會(hui) 進一步導致加帽失敗，因此需始終放置在冰上。此外，也可以通過體(ti) 係優(you) 化適當提高用量以保證加帽反應順利進行。 其他用途可參考上述用途或相關(guan) 文獻資料進行實驗 運輸和保存方法

運輸條件：藍冰/幹冰運輸

保存溫度：-20℃以下保存

避免反複凍融或頻繁暴露於(yu) 溫度變化中，shou次使用時建議進行分裝。

產(chan) 品效期：12個(ge) 月

注意事項

1. 使用時宜存放在冰盒內(nei) 或冰浴上，使用完畢後宜立即放置於(yu) -20℃保存；

2. 為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作；

3. 產(chan) 品僅(jin) 供研究使用