核糖核酸酶 H說明書

核糖核酸酶 H說明書(shu)

產(chan) 品詳情

核糖核酸酶H（RNase H）是一種核糖核酸內(nei) 切酶，它能夠特異性地水解雜交到DNA鏈上的RNA 的磷酸二酯鍵。該酶不能消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA。主要用於(yu) cDNA第二鏈合成時除去 mRNA ；以及一步法RT-PCR中去除mRNA鏈，生成cDNA單鏈，提高cDNA與(yu) 引物的配對效果，改善RT-PCR效果。

本公司RNase H是重組表達，並經多步純化製備的大腸杆菌RNase H重組蛋白。

特點

Ø 不消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA

Ø 熱失活：65℃×20 分鍾

濃度

5U/μl

活性定義(yi)

1單位指在溫度為(wei) 37℃，1× RNase H 反應緩衝(chong) 體(ti) 係的條件下，20min內(nei) 能水解20 pmol熒光標記的50 bp RNA-DNA雜交鏈成1 nmol核苷酸所需的酶量。

活性測定條件

50 mM Tris-HCl，75 mM KCl，3 mM MgCl₂，10 mM DTT(pH 8.3 @ 25℃)，37℃溫育。

酶貯存緩衝(chong) 液

10mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，200 µg/ml BSA，50% Glycerol ，pH 7.4 @ 25°C。

產(chan) 品包裝規格及組成

適用範圍

Ø 除去雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A)

Ø 在cDNA第二鏈合成時除去 mRNA

應用舉(ju) 例

1、RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA鏈

1）按下表配製反應體(ti) 係

2) 35°C反應5-10min；

3) PCR反應。

4) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進行後續實驗

2、cDNA第二鏈合成時除去 mRNA

1）按下表配製反應體(ti) 係

2) 35°C反應15-30min；

3) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進行後續實驗

運輸與(yu) 保存

-20℃保存

注意事項

l 本RNase H為(wei) 常溫酶，在16-42℃範圍內(nei) 具有高活性，最佳反應溫度為(wei) 32-37℃。

l 本酶不耐高溫，因此反應溫度不能高於(yu) 42℃。

警告: 本產(chan) 品僅(jin) 限科研實驗使用，臨(lin) 床應用安全性和有效性未鑒定，不可用於(yu) 醫療臨(lin) 床診斷。

質量控製

相關(guan) 測試表明無外源內(nei) 切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase汙染。PCR方法檢測無宿主殘餘(yu) DNA。