無機焦磷酸酶 （0.1 U/μL）說明書

無機焦磷酸酶 （0.1 U/μL）說明書(shu)

產(chan) 品描述

本製品為(wei) 利用大腸杆菌大規模發酵表達的 重組無機焦磷酸酶（酵母來源），可催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽：P2O7 4- +H2O+PPase→2HPO4 2- 。這是一個(ge) 高放能的反應，自然條件下，無機焦磷酸酶可以為(wei) 蛋白、RNA和DNA的生物合成反應提供熱力學動力，並在脂代謝，鈣吸收以及骨形成等生物轉化過程中發揮作用。該酶在實驗應用中能夠高效發揮作用，保證反應的進行。在分子生物學中可用於(yu) 反轉錄反應中提高RNA產(chan) 量。

來源：重組E.Coli

分子量：63 kDa

純度：≥95%

比活：0.1 U/μL

比活單位定義(yi) ：標準反應條件下每分鍾催化無機焦磷酸鹽生成 1 μmol 磷酸鹽所需的酶量定義(yi) 為(wei) 1 個(ge) 活性單位

存儲(chu) 緩衝(chong) 液：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% 甘油， pH 8.0

質量保證

1. SDS-PAGE膠檢測僅(jin) 可見清晰單一的目的條帶；

2. 酶動力學實時熒光法顯示無RNA酶汙染。

產(chan) 品性質1. 無機焦磷酸酶是一種金屬蛋白酶，達到最大活性需要 Mg 2+ 的參與(yu) ；2. 熱穩定性：最佳反應溫度為(wei) 25 ℃，65 ℃ 10min 可使該酶失活；3. 反轉錄反應中提高RNA產(chan) 量；4. 增強DNA複製能力。產(chan) 品組分

產(chan) 品應用1. 優(you) 化 RNA 轉錄：提高體(ti) 外轉錄反應的 RNA 產(chan) 量；2. 優(you) 化 PCR 反應：提高效率，增加 DNA 產(chan) 量；3. 去除利用焦磷酸鹽測定法來進行 SNP 基因分型的試劑中的 PPi 汙染物；4. 促進蛋白質、RNA 和 DNA 的合成；5. 催化 PPi + H2O→2Pi 的反應；6. 作為(wei) 反應緩衝(chong) 液的組分用於(yu) 氨酰化的測定，以對摻入tRNA的[3H]L-甲硫氨酸進行定量。運輸和保存方法

幹冰運輸。-20℃保存，有效期一年。推薦分裝保存，避免反複凍融。

應用實例1. 在RNase free的離心管中加入右側(ce) 表格中各組分配製反應體(ti) 係；2. 將上述反應液混合均勻，低速離心至管底，37 ℃孵育4個(ge) 小時。若轉錄本長度小於(yu) 100 nt，增加反應時間至4-8個(ge) 小時；3. 轉錄後取樣品進行凝膠電泳，取樣1 μL稀釋到5 μL，然後用1%的瓊脂糖凝膠進行檢測，以確定轉錄是否成功；4. 反應完成後，加入DNase Ⅰ（RNase free），37 ℃孵育30 min以去除模板DNA。 注：（1）為(wei) 了特定區域的有效轉錄，建議在其區域下遊把模板DNA預先切成平端或5′突出末端。（2）反應體(ti) 係於(yu) 室溫配置。由於(yu) 10×Transcription Buffer 中含有亞(ya) 精胺，低溫下亞(ya) 精胺濃度過高容易引起DNA模板沉澱，建議最後加入模板DNA。（3）建議在PCR儀(yi) 中進行反應，為(wei) 防止蒸發，建議開啟熱蓋功能。（4）使用試劑、容器等無RNA酶汙染。注意事項1、使用時宜存放在冰盒內(nei) 或冰浴上，使用完畢後宜立即放置於(yu) -20 ℃保存；2、該酶在多種反應 Buffer 中均具有活性，通常該酶在 HDA、LAMP 等實驗中，直接加入即可；3、該酶的用量在不同的實驗中需要優(you) 化，通常在 0.05~1 U/ml 濃度調整；4、該酶的最佳反應溫度為(wei) 25 ℃，其在 16~37℃均有活性，65 ℃ 10min 可使該酶失活；5、輔因子：Mg2+對於(yu) 酶發揮活性是必須的。6、為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。7、本產(chan) 品主要用於(yu) 科研領域，不宜用於(yu) 臨(lin) 床診斷或其他用途。