T4 DNA聚合酶 (Exo-)說明書

產(chan) 品詳情

T4 DNA聚合酶是來源於(yu) T4噬菌體(ti) 的DNA聚合酶，又名T4 gp43，分子量為(wei) 104kDa，在T4噬菌體(ti) DNA複製中負責先導鏈和滯後鏈5’→3’方向的脫氧核糖核酸合成。T4 DNA polymerase的聚合酶活性強於(yu) DNA 聚合酶 I，不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本T4 DNA polymerase(exo-)為(wei) 通過點突變D219A改造，使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低，但保留了完整的聚合酶活性。

本公司T4 DNA polymerase 是重組表達，並經多步純化製備的重組蛋白。

特點

Ø 無鏈置換活性

Ø 無5’-3’外切酶活性，不能進行切口平移

Ø 3’-5’外切酶活性大大地降低

Ø 熱失活：75°C for 20 min

濃度

5U/μl

活性定義(yi)

一個(ge) 活力單位即在37℃條件下，30分鍾內(nei) 催化10 nmol dNTP的摻入反應成為(wei) 酸不溶性物質所需的酶量。

活性測定條件

1×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，10 mM MgCl₂，0.5mM DTT，0.1mg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C)，37℃溫育

酶貯存緩衝(chong) 液

     20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，10 mM MgCl₂，5mM DTT，50% Glycerol，pH 7.5。

產(chan) 品包裝規格及組成

適用範圍

Ø 縫隙填充(無缺口平移活性)

Ø 去除3’突出單鏈或補平5’突出單鏈，形成平末端

Ø 生成無縫克隆中的5’突出端，實現基因和載體(ti) 的互補配對

應用舉(ju) 例

1.補平5’突出單鏈，形成平末端

1）按下表配製反應體(ti) 係

2) 37℃×30min反應，

3）75℃×15min失活酶，

按需進行後續實驗。

質量控製

經過嚴(yan) 格的質控檢測，確保該產(chan) 品具有最高的活性和純度。

運輸與(yu) 保存

-20℃可保存2年，避免反複凍融。

注意事項

l 適用於(yu) 凹陷單鏈區聚合補平反應（聚合酶反應）的緩衝(chong) 液包括：AM Buffer A-D、A1-D1、T4 DNA連接酶反應緩衝(chong) 液。

l 鑒於(yu) AM Buffer B2是此酶最youBuffer，當使用不包含BSA的緩衝(chong) 液時，建議補充BSA。

l Activity in AM Buffers：AM Buffer A: 60% ；AM Buffer B、C、D: 100%。

l 離子強度超過100 mM時活性將被抑製，SH基的還原劑促進活性。

l 活性易受模板DNA高級結構影響，T4 gene 32（T4 SSB）蛋白可以顯著提高聚合酶活性。