線性聚乙烯亞胺PEI MW40000說明書

產(chan) 品描述

BIOHUB 線性聚乙烯亞(ya) 胺PEI MW40000 轉染試劑係列是基於(yu) 聚乙烯亞(ya) 胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chan) 品，因其較高的轉染效果，已廣泛應用於(yu) AAV，LV和重組蛋白等工業(ye) 化生產(chan) 。

聚乙烯亞(ya) 胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔兩(liang) 個(ge) 碳原子，即每第三個(ge) 原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"體(ti) (proton sponge)，因此，非常容易結合帶負電荷的核酸分子，形成帶正電荷的複合物顆粒，該顆粒與(yu) 細胞表麵陰離子結合，很容易通過內(nei) 吞作用進入細胞；並且可抵禦溶酶體(ti) 的降解作用，從(cong) 而提高核酸分子的表達水平。

基本信息   CAS49553-93-7

分子式  (C2H5N)n . xHCl

分子量  40,000 (~22,000 free base)

熔點  73-75℃

溶解性  溶於(yu) 冷水

不溶於(yu)  常用有機溶劑（乙醇、丙酮、四氫呋喃）

形式  白色固體(ti) 粉末

生物毒性  未知

安全防護  手套，護目鏡，口罩

存儲(chu)  粉末至少可以保存一年， PEI內(nei) 含自由氨基，建議開封後4℃幹燥保存，減緩氧化過程。

運輸  常溫運輸

特點  大量實驗數據反饋，細胞通用性好，有非常好的轉染效果，尤其對293，CHO細胞係有特別顯著的轉染效果。

配置方法

轉染操作流程：(貼壁細胞轉染方法)

1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細胞並計數（不建議用胰酶）。將細胞鋪入細胞培養(yang) 的器皿，每個(ge) 孔加入的細胞量參考下圖表1，一般18-24小時（sf9細胞為(wei) 3-4小時）後轉染。轉染時細胞匯合度應至少達到 70~80%以上。轉染前更換為(wei) 含5%血清的生長培養(yang) 基。

2. 準備 DNA-PEI 複合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yang) 基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yang) 基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻後，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI複合物。當溶液體(ti) 積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。 （稀釋PEI和DNA的體(ti) 積為(wei) 培養(yang) 體(ti) 積的1/10-1/20, DNA濃度為(wei) 1ug/ml）

3. 轉染細胞： 直接向每個(ge) 孔中加入 DNA-PEI複合物並輕輕渦旋培養(yang) 板/培養(yang) 皿。轉染4-6小時（sf9細胞為(wei) 2小時 )後，更換為(wei) 生長培養(yang) 基。

4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2培養(yang) 箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染後最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合的檢測時間。

5. 轉染 24 h 後，將細胞傳(chuan) 代至新鮮的生長培養(yang) 基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yang) 箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與(yu) 轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養(yang) 基。

轉染操作流程：(懸浮細胞轉染方法)

1. 轉染前準備：懸浮細胞傳(chuan) 代接種於(yu) 適量含懸浮細胞生長培養(yang) 基中，合適條件下培養(yang) 。根據培養(yang) 瓶大小調整細胞密度（例100mL培養(yang) 瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然後旋緊瓶口放入搖床繼續培養(yang) ，2~4小時後可以進行轉染。

2. 準備 DNA-PEI 複合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yang) 基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yang) 基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻後，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI複合物。當溶液體(ti) 積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞：將PEI-DNA轉染複合物逐滴加入到細胞培養(yang) 液中，搖勻後旋緊瓶口放回搖床合適培養(yang) 條件下培養(yang) 至可以分析檢測。

4. 孵育細胞和分析結果：轉染後一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合的檢測時間。

5. 如果要獲得更多的蛋白產(chan) 量，有文獻表明轉染後24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考範圍（1:2—1:5）之間，可以增加蛋白產(chan) 量，稀釋效應與(yu) 最佳稀釋比率應根據經驗確定。

產(chan) 品背景

       BIOHUB 生產(chan) 的78Bio PEI是一種優(you) 化的線性陽離子聚合物轉染試劑,分子量分別為(wei) 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高，但毒性也略大於(yu) 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達係統中，相比於(yu) 市麵上的脂質體(ti) 78BioPEI 都表現出高的蛋白表達量（無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器），以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重複性，並且十分經濟的高性價(jia) 比轉染試劑。產(chan) 品具有以下特點：

1.轉染效率高，細胞毒性低；  蛋白表達量高；

2.節約成本：BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ，進口品質，親(qin) 民價(jia) 格，至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本；

3.適用於(yu) HEK293 等真核細胞的轉染；

4.適用於(yu) 貼壁細胞和懸浮細胞的轉染；

5.適用於(yu) 有血清和無血清的轉染條件；

6. 無機試劑，無動物源成分；

7. 產(chan) 品穩定，質控嚴(yan) 格；

8. 工藝流程適用範圍廣，容易優(you) 化 適合小規模培養(yang) 板，培養(yang) 瓶到大規模的生物反應器。

產(chan) 品反饋

注意事項

 1. 為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

 2. 本產(chan) 品主要用於(yu) 科研領域，不宜用於(yu) 臨(lin) 床診斷或其他用途。

 3.加熱或加酸都有助於(yu) 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那麽(me) 多，詳細用量可試加一點 ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那麽(me) 低。

 4.一定要溶解充分，溶解不充分會(hui) 影響後續的轉染效率.

 5.冷凍後可能會(hui) 影響其後續轉染效果。

特別提醒：初次使用 78PEI 進行不同基因轉染時應先做預試，優(you) 化出適合自己實驗的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常篩選範圍在 1:1 到 5:1 之間，如果之前用過Polysciences品牌的 PEI，用 78BioPEI 時應適當降低使用濃度。