熱敏UDG酶說明書

更新時間：2023-10-24 點擊次數：510

產品詳情

UDG酶可催化水解DNA中的尿嘧啶堿基與核糖之間的N-糖苷鍵，釋放遊離尿嘧啶堿基。本產品來源於大腸杆菌重組表達的嗜冷細菌的ung基因，分子量為 25KDa。本酶催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放遊離尿嘧啶，對 RNA 無活性。本酶主要應用於防止PCR 擴增產物的交叉汙染。它的作用原理基於：在 PCR 反應中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中，形成含 dU 堿基的 PCR 擴增產物，UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 dU 堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴增產物，消除上輪擴增產物對新樣本的汙染問題。

特點

Ø 25-37度範圍內(nei) 活性高，避免了ji端熱敏UDG常溫失活的缺陷；

Ø 本酶在60℃下熱處理10分鍾，完quan不可逆失活；

Ø 本酶的反應體(ti) 係與(yu) Taq DNA聚合酶buffer相同，保證了活性體(ti) 係的一致性。

濃度

1U/μl

活性定義

37℃反應條件下，每分鍾催化 60 pmole尿嘧啶堿基從含尿嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為 1 U。

活性測定條件

10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 20 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween 20, 1.5 mM MgCl2 中，37℃ 溫育。

酶貯存緩衝液

20mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween 20, 50% glycerol。

產品包裝規格及組成

Component	78DC10123-200U	78DC10123-1000U
熱敏UDG	200U	1000U
10×UDG Buffer	0.4 ml×1	1.0 ml×1

運輸與保存

-20℃保存藍冰運輸

適用範圍

主要應用於防止PCR 擴增產物的交叉汙染。作用原理基於：在 PCR 反應中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中，形成了含 dU 堿基的 PCR 擴增產物，UDG能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 U 堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴增產物，消除上輪擴增產物對新樣本的汙染問題。

應用舉例

防止PCR產(chan) 物汙染的使用方法

1. 按如下表格配製PCR反應液

PCR組份	體(ti) 積/μl	終濃度
10×Taq酶 Buffer	5	1×
dNTPs（2.0 mM）	5	0.2 mM
dUTP（2.0 mM）	1-5	0.04-0.2 mM
引物F（10 μM）	1.5	0.3 μM
引物R（10 μM）	1.5	0.3 μM
Template	1-5	/
熱啟動Taq聚合酶（2.5U/μl）	1.0	2.5U
熱敏UDG（1U/μl）	1.0	1U
ddH2O	Varable	/
總體(ti) 積	50	/

2. 37℃下反應10分鍾。

3. 在95℃下熱失活UDG 2分鍾（此步驟可省略，直接進行PCR，預變性步驟會(hui) 失活UDG）。

4. PCR反應。

質量控製

無內(nei) 切酶活性：50 U的本酶和1 μg的pBR322 DNA在37℃下反應2小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。

品名	貨號	規格	品牌
熱敏UDG酶	78DC10123-200U	200U	BIOHUB
熱敏UDG酶	78DC10123-1000U	1000U	BIOHUB

上一篇：線性聚乙烯亞胺PEI MW40000說明書
下一篇：優級胎牛血清 Fetal Bovine Serum（FBS, Superfine）說明書