細胞凍存液的原理及配製方法

細胞凍存及複蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞(ya) 碸作保護劑，這兩(liang) 種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nei) 的水分滲出細胞外，減少細胞內(nei) 冰晶的形成，從(cong) 而減少由於(yu) 冰晶形成造成的細胞損傷(shang) 。複蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nei) 即融化，避免由於(yu) 緩慢融化使水分滲入細胞內(nei) 形成胞內(nei) 再結晶對細胞造成損傷(shang) 。

   細胞凍存是細胞培養(yang) 、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建係中，及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體(ti) 的製備過程中，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞(ya) 克隆細胞的凍存保種常常是不能缺少的實驗操作。因為(wei) 在沒有建立一個(ge) 穩定的細胞係或穩定分泌抗體(ti) 的細胞係的時候，細胞的培養(yang) 過程中隨時可能因細胞的汙染、分泌抗體(ti) 能力的喪(sang) 失或遺傳(chuan) 變異等等導致實驗失敗，如果沒有原始細胞的凍存，則因為(wei) 上述的意外而前功盡棄。

細胞凍存常用凍存液的成分如下：

20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yang) 液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細胞內(nei) 冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體(ti) 積的10%，然後濾膜過濾後分裝保存備用。

注意事項：

1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過濾除菌。

2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。

3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體(ti) 積比)。

DMSO在凍存液中的作用： DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過細胞膜，降低細胞外未結冰溶液中溶質濃度，使細胞免受高濃度溶質的損傷(shang) ,細胞內(nei) 水分也不會(hui) 過分外滲，避免了細胞過分脫水皺縮；DMSO與(yu) 水分子結合，可使冰點下降，減少細胞內(nei) 冰晶的形成，從(cong) 而減少冰晶損傷(shang) 。